[求助] [已解决] 显微镜观察96孔板时，细胞在靠近孔边缘的位置出现阴影

TA的每日心情

衰
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发表于 2019-7-2 10:36 | 显示全部楼层 |阅读模式

在右上角的区域用红笔标出了比较明显的现象

目前实验发现了以下现象：
1.孔壁涂黑之后黑影消失；
2.使用NA=0.38较小的物镜时也没有黑影，NA=0.42的物镜有；

这种现象是否有理论上的解释？该如何改善？

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zidongkong

2019-8-7 10:09

Aex 发表于 2019-8-7 08:29
1.对涂黑的是板孔侧壁2.目前做实验来看，这个阴影应该还是与孔壁的反射光有关。
3.外形尺寸限制，目前用 ...

你使用的照明为阿贝照明，成像面照度不均匀，可以改变照明装置与被测板卡之间间距，这样应该可以避免出现阴影。

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冷夜

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发表于 2019-7-2 13:38 | 显示全部楼层

不清楚你说的黑影是什么，能否在图中标记，还有你说的孔板是指图中黑色的圆孔么（能看到2排）。我现在接触显微镜比较多，也在搭一些成像系统的光路，希望多多交流。

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楼主| 发表于 2019-7-3 09:12 | 显示全部楼层

冷夜发表于 2019-7-2 13:38
不清楚你说的黑影是什么，能否在图中标记，还有你说的孔板是指图中黑色的圆孔么（能看到2排）。我现在接触 ...

黑影就是图中拿红线画出的地方，目前怀疑是鬼像，还没找到是哪一个面的光线成像了。
96孔板是细胞实验用的容器，如图，我给的是一个孔内边缘区域出现该现象的采样

图中的黑色圆形是公司生产的特殊培养板，可以通过电路来计数。

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啥时候全息投影

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发表于 2019-7-13 12:03 | 显示全部楼层

先染色，在将没有黑点的和有黑点的图片放上来对比，看不清

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楼主| 发表于 2019-7-15 08:46 | 显示全部楼层

啥时候全息投影发表于 2019-7-13 12:03
先染色，在将没有黑点的和有黑点的图片放上来对比，看不清

对比
第一张不正常的样子，第二张是正常的样子

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发表于 2019-7-26 09:33 | 显示全部楼层

Aex 发表于 2019-7-15 08:46
对比
第一张不正常的样子，第二张是正常的样子

嗯嗯，看到了，有鬼影

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focuslight

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发表于 2019-8-6 10:53 | 显示全部楼层

冷夜发表于 2019-7-2 13:38
不清楚你说的黑影是什么，能否在图中标记，还有你说的孔板是指图中黑色的圆孔么（能看到2排）。我现在接触 ...

你好，，能加好友向你学习么

我最近也一直在折腾显微成像这块

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zidongkong

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发表于 2019-8-6 17:43 | 显示全部楼层

请问涂黑涂的是那个部位？是板孔侧壁吗？NA0.42是否超出景深？

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楼主| 发表于 2019-8-7 08:29 | 显示全部楼层

zidongkong 发表于 2019-8-6 17:43
请问涂黑涂的是那个部位？是板孔侧壁吗？NA0.42是否超出景深？

1.对涂黑的是板孔侧壁2.目前做实验来看，这个阴影应该还是与孔壁的反射光有关。
3.外形尺寸限制，目前用的是一个扩散5度的光源（非柯勒照明），照明光斑略大于一个孔，光斑缩小到一定程度时，阴影就不见了。
4.跟景深应该无关，对焦不清楚的情况下，依然能看到阴影。

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zidongkong

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发表于 2019-8-7 10:09 | 显示全部楼层本楼为最佳答案

这个最佳答案由 zidongkong 给出，感谢 zidongkong 的回答。

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Aex 发表于 2019-8-7 08:29
1.对涂黑的是板孔侧壁2.目前做实验来看，这个阴影应该还是与孔壁的反射光有关。
3.外形尺寸限制，目前用 ...

你使用的照明为阿贝照明，成像面照度不均匀，可以改变照明装置与被测板卡之间间距，这样应该可以避免出现阴影。

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